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公布日期
2019-03-15 公布专利
2019-03-12 公布专利
2019-03-08 公布专利
2019-03-05 公布专利
2019-03-01 公布专利
2019-02-26 公布专利
2019-02-22 公布专利
2019-02-19 公布专利
2019-02-15 公布专利
2019-02-12 公布专利
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特异启动子NtR2驱动AhRESS在花生发状根系产白藜芦醇的新濠天地线上娱乐有效

申请号: CN201610025960.2 全文下载
申请日: 2016-01-15 公开/公告日: 2019-03-12
公开/公告号: CN105505990B 主分类号: C12N15/84
申请/专利权人: 福建农林大学
发明/设计人: 陈华;庄伟建;马世伟;张冲;蔡铁城;邓烨
分类号: C12N15/84;A01H5/06
搜索关键词: 特异 启动子 ntr2 驱动 ahress 花生 根系 藜芦 新濠天地线上娱乐
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【摘要】:
本发明涉及特异启动子NtR2驱动AhRESS在花生发状根系产白藜芦醇的新濠天地线上娱乐,属于植物基因工程领域。利用发根农杆菌介导将烟草根特异启动子NTR2驱动花生白藜芦醇合酶基因AhRESS载体pBI121‑NTR2‑AhRESS遗传转化花生,获得特异表达AhRESS的转基因花生发状根。利用有机溶剂浸提法提取转基因花生发状根中白藜芦醇,经高效液相色谱(HPLC)测定,其白藜芦醇含量最高为66.16μg/g(FW),是未转基因发状根中白藜芦醇含量的3倍。本发明为利用烟草根特异启动子驱动花生白藜芦醇合酶基因AhRESS在花生发状根中特异表达,进而生产白藜芦醇提供了良好的基础。
 
【主权项】:
1.特异启动子NtR2驱动AhRESS在花生发状根系产白藜芦醇的新濠天地线上娱乐,其特征在于:包括以下步骤:(1)烟草根特异启动子NtR2驱动花生白藜芦醇合酶基因AhRESS表达载体pBI121‑NtR2‑AhRESS经发根农杆菌介导转化花生;(2)转pBI121‑NtR2‑AhRESS花生发状根液体悬浮培养;(3)转pBI121‑NtR2‑AhRESS花生发状根白藜芦醇含量的检测;步骤(1)的具体新濠天地线上娱乐为:1)将烟草根特异启动子NtR2连接至pMD18‑T 载体中,得到pMD18‑NtR2载体;2)pBI121‑NtR2‑GUSA载体构建:利用限制性内切酶BamHⅠ及SacⅠ对pBI121质粒载体进行酶切,切除该载体上的GUSA基因,利用带有限制性酶切位点的特异引物从pCAMBIA1301载体中克隆GUSA基因,连接至酶切后的pBI121载体上,得到pBI121‑GUSA载体;将pBI121‑GUSA载体进行酶切反应,切除35S启动子,将pMD18‑NtR2载体进行酶切反应,将NtR2启动子连接至pBI121‑GUSA载体中,得到pBI121‑NtR2‑GUSA载体;3)pBI121‑NtR2‑AhRESS载体的构建:将花生白藜芦醇合酶基因AhRESS基因,连接到pBI121‑NtR2‑GUSA载体中,得到pBI121‑NtR2‑AhRESS载体;所述步骤(1)中烟草根特异启动子NtR2的序列为SEQ ID No:1,花生白藜芦醇合酶基因AhRESS的序列为SEQ ID No:2;所述步骤(1)中发根农杆菌介导的花生的遗传转化外植体分别为叶片、子叶、上胚轴和下胚轴外植体;所述步骤(2)中转pBI121‑NtR2‑AhRESS花生发状根液体悬浮培养所用培养基为MS培养基+500 mg/L Cef,第一次继代培养基为MS培养基+300 mg/L Cef,第二次继代培养基为MS培养基+100 mg/L Cef,第三次继代培养基为MS培养基;三次继代后Cef浓度降至0;所述步骤(3)中转pBI121‑NtR2‑AhRESS花生发状根白藜芦醇含量的检测新濠天地线上娱乐为HPLC,色谱条件为:色谱柱 ODS,流动相乙腈:水=25:75,流速1.0 mL/min,检测波长306 nm,柱温25℃,进样量10 μL。
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